Efecto del nitrato de plata (AgNO3) en el crecimiento in vitro de brotes de Anthurium magnificum Linden

Anthurium magnificum Linden es una importante planta ornamental perteneciente a la familia Araceae. Esta especie es muy demandada como planta de maceta para la decoración de interiores y jardines, así como follaje de corte. Los métodos de propagación tradicionales en esta especie presentan ciertas desventajas por lo que no permiten satisfacer la creciente demanda. Estas limitantes convierten al cultivo de tejidos vegetales en el método más eficiente para propagar plantas de Anthurium magnificum a un ritmo más rápido que los métodos de propagación convencionales. En el cultivo de tejidos vegetales el nitrato de plata adicionado a los medios de cultivo actúa como un inhibidor de la acción del etileno y desempeña un papel crucial en la regulación de procesos fisiológicos esenciales de las plantas. El presente trabajo tuvo como objetivo determinar el efecto de diferentes concentraciones de nitrato de plata en el crecimiento in vitro de brotes de Anthurium magnificum. Para ello, se cultivaron brotes in vitro de Anthurium magnificum en medios de cultivo enriquecidos con diferentes concentraciones de nitrato de plata. Los resultados mostraron que los mayores valores en las variables altura de la planta, número de raíces y longitud de las raíces se obtuvieron en un medio de cultivo con 1,0 mg L-1 de nitrato de plata. En la variable área foliar de la planta los mayores valores se presentaron en los medios de cultivo que contenían nitrato de plata independientemente de la concentración empleada.

Anthurium magnificum Linden is an important ornamental plant belonging to the Araceae family. This species is in great demand as a pot plant for interior and garden decoration, as well as cut foliage. The traditional propagation methods in this species have certain disadvantages, which is why they cannot satisfy the growing demand. These limitations make plant tissue culture the most efficient method to propagate Anthurium magnificum plants at a faster rate than conventional propagation methods. In the culture of plant tissues, silver nitrate added to the culture media acts as an inhibitor of the action of ethylene and plays a crucial role in the regulation of essential physiological processes in plants. The objective of this work was to determine the effect of different concentrations of silver nitrate on the in vitro growth of Anthurium magnificum shoots. For this, in vitro shoots of Anthurium magnificum were cultivated in culture media enriched with different concentrations of silver nitrate. The results showed that the highest values in the variables plant height, number of roots and length of the roots were obtained in a culture medium with 1.0 mg L-1 of silver nitrate. In the variable leaf area of the plant, the highest values were presented in the culture media that contained silver nitrate, regardless of the concentration used.

Somatic Embryogenesis in Papaya (Carica papaya L.).

High mortality rates of in vitro plants during ex vitro acclimatization, due to low rooting, is one of the main problems of papaya tissue culture. This work was carried out with the objective to obtain 100% hermaphroditic in vitro plants of the papaya cultivar "Maradol Roja" by somatic embryogenesis, which have an adequate rooting system that allows them a higher survival percentage in the ex vitro acclimatization phase. In international scientific literature, there are several protocols; however, not all of them cover the different phases of somatic embryogenesis. This chapter describes a complete and optimized protocol from immature zygotic embryos in this cultivar. It also looks at the morpho-anatomical characterization of somatic embryos in the different stages of ontogenetic development, as well as high survival rates under ex vitro conditions of the plants obtained. It can be used for genetic improvement and propagation of this species.

Anatomía comparada de plantas de Dioscorea alata L. clon Caraqueño cultivadas en tres ambientes de crecimiento in vitro / Compared anatomy of Dioscorea alata L. clone Caraqueño plants cultivated in three in vitro growth environments

La conservación in vitro de Dioscorea alata L. clon Caraqueño es fundamental para garantizar la propagación y distribución de material de plantación sano a los productores, y disponer de un banco in vitro de un clon de gran valor agronómico y comercial en la región oriental de Cuba. Con el fin de evaluar las modificaciones anatómicas que se producen en plantas de ñame en tres condiciones de cultivo in vitro: plantas conservadas por métodos de mínimo crecimiento, plantas regeneradas y plantas en fase de multiplicación en el medio MS 75 %, se realizó un análisis de la anatomía foliar y caulinar a partir de cortes transversales de la lámina foliar y del tallo, y cortes longitudinales y transversales de microtubérculos formados durante el proceso de conservación. Las hojas de las plantas conservadas mostraron menor espesor del mesófilo y la epidermis y el área de los haces conductores del tallo también fue menor, debido al proceso de stress durante la conservación in vitro. Sin embargo, durante la recuperación del material conservado a través de la regeneración y la multiplicación in vitro se restablecieron de manera normal estos parámetros. También se evidenció que los microtubérculos formados en la conservación in vitro, poseen parénquima amilífero con abundantes gránulos de almidón, capa delgada de parénquima cortical, y haces conductores poco desarrollados, todo lo cual indica la presencia de actividad meristemática.

The in vitro conservation of Dioscorea alata L. clone Caraqueño is fundamental to guarantee the propagation and distribution of healthy plantation material to the farmers and the establishment of one in vitro bank of this clone of great agronomic and commercial value in the Oriental Region of Cuba. With the purpose of evaluating the anatomical modifications that take place in yam plants under three in vitro culture conditions: conserved plants by slow growth, regenerated plants and in plants multiplication phase in MS 75% medium, was carried out an analysis of the foliar and caulinar anatomy from transversal cuts of the foliar sheet and of the stem, and longitudinal and transversal cuts of microtubers formed during the conservation process. Smaller thickness of the mesophyll and of the epidermis in the leaves of the conserved plants were showed and the conductive sheaves area of the stem were also smaller, due to the stress process during the in vitro conservation. However during the recovery of the conserved material through the regeneration and the in vitro multiplication were reestablished to their normal state these parameters. It was also evidenced that the microtubers formed in the in vitro conservation, have reserve parenchyma with abundant starch granules, thin cortical parenchyma and conductive sheaves little developed were determined. All this characteristics indicated the presence of meristematic activity.

FORMACIÓN DE EMBRIONES SOMÁTICOS A PARTIR DE SEMILLAS INMADURAS EN Sorghum bicolor VARIEDAD CIAP 132-R / Formation of Somatic Embryos from Immature Seeds of Sorghum bicolor Sorghum Variety CIAP 132-R

Existen varios protocolos de regeneración de plantas vía embriogénesis somática de Sorghum bicolor (L.) Moench, sin embargo los porcentajes de formación de callos con estructuras embriogénicas y regeneración de plantas son bajos. Es por ello que esta investigación tuvo como objetivo generar embriones somáticos en sorgo rojo variedad CIAP 132-R. Se ensayaron diferentes concentraciones de 2,4-D para la formación de callos, así como tres concentraciones de ácido ascórbico para eliminar la exudación de compuestos fenólicos por el explante. También para la formación de los embriones somáticos a partir de los callos se evaluaron diferentes concentraciones de 2,4-D y 6-BAP. El mayor porcentaje de formación de callos (57,5 %) se alcanzó con 18,1 µM de 2,4-D. Con la adición al medio de cultivo de 50,0 mg.l-1 de ácido ascórbico fue posible eliminar los compuestos fenólicos en el explante y en el medio de cultivo, además permitió incrementar el porcentaje de formación de callos con estructuras embriogénicas hasta un 95 %. El número mayor de embriones somáticos por callo se alcanzó en el medio de cultivo con concentraciones de 4,52 µM de 2,4- D, combinada con 2,22 µM de 6-BAP. Por primera vez, se logró la formación eficiente de embriones somáticos a partir de los callos obtenidos de semillas inmaduras germinadas como explante inicial en la variedad CIAP 132-R.

Several protocols of plant regeneration via somatic embryogenesis from Sorghum bicolor (L.) Moench have been development, however the percentage of calluses with embryogenic structures and plant regeneration are low. Therefore this study aimed to generate somatic embryos in red sorghum variety CIAP 132-R. Different concentrations of 2,4-D for callus formation, and three concentrations of ascorbic acid to remove phenolics exudation were assayed by explant. For the formation of embryos different concentrations of 2,4-D and 6-BAP were evaluated. The highest percentage of callus formation (57.5 %) was achieved with 18.1 µM 2,4-D. With the addition to the culture medium of 50.0 mg.l-1 of ascorbic acid was possible to eliminate the phenolic compounds in the explant and in the culture medium; also it allows increasing the percentage of calluses with embryogenic structures up to 95 %. The highest number of somatic embryos per callus was achieved with a reduction in the culture medium of 2,4-D to 4.52 µM in combination with 2.22 µM 6-BAP. For the first time, the efficiency of somatic embryo formation was obtained from the freshly germinated sprouts of immature seeds as initial explant CIAP 132-R.

Efecto de dos citoquininas, ácido ascórbico y sacarosa en la obtención de plantas in vitro de Sorghum bicolor para la formación de callos / Effect of two cytokinin, ascorbic acid and sucrose to obtain in vitro shoots of sorghum for calli formation

El trabajo se realizó con el objetivo de obtener brotes in vitro vía organogénesis directa en sorgo variedad CIAP 2E-95, para la formación de callos con estructuras embriogénicas. Se tomaron semillas maduras de plantas que crecían en condiciones controladas, las que se desinfectaron y fueron colocadas a germinación en un medio de cultivo con las sales MS, mioinositol 100 mg L-1, sacarosa 3%, pH 5,7, Fitagel 2,5 g L-1. Para la multiplicación de los brotes, se estudiaron diferentes concentraciones de 6 Bencilaminopurina (6-BAP) y kinetina. El empleo en el medio de cultivo de multiplicación con las sales MS y 6- BAP 0,22 mg L-1, incrementó el número de brotes por explante y se observó la presencia de oxidación fenólica. La oxidación fenólica se contrarrestó con la adición al medio de cultivo de 50 mg L-1 de ácido ascórbico y se incrementó significativamente el número de brotes, altura y número de hojas. En la obtención de brotes in vitro de calidad para la formación de callos, estos fueron engrosados con las sales MS, sin reguladores de crecimiento, ácido ascórbico 50 mg L-1, Fitagel 2,5 g L-1, pH 5,7 y 40 g L-1 de sacarosa. La formación de callos con estructuras embriogénicas a partir del cilindro central de las hojas enrolladas del segmento más próximo a la base de los brotes engrosados se alcanzó a los 45 días de cultivo. Los segmentos del cilindro central de las hojas enrolladas constituyen una fuente segura y promisoria de explantes para la formación de callos embriogénicos.

The current work aimed to obtain in vitro shoots by direct organogenesis from sorghum variety CIAP 2E-95, for the formation of calluses with embryogenic structures. Mature seeds were collected from plants grown under controlled conditions, which were disinfected and were placed in a germination medium with MS salts, myo-inositol 100 mg L-1, 3% sucrose, pH 5.7, phytagel 2.5 g L-1. Different concentrations of 6-benzylaminopurine (6-BAP) and kinetin were studied for shoot multiplication. Using 6 - BAP 0.22 mg L-1 in the multiplication culture medium increased the number of shoots per explant, showing phenolic oxidation. Adding 50 mg L-1 of ascorbic acid to the culture medium resisted phenolic oxidation and the number of sprouts (5.0), height and number of leaves increased significantly. Quality in vitro buds for callus formation were obtained stimulating the thickening by using MS salts, without growth regulators, ascorbic acid 50 mg L-1, phytagel 2.5 g L-1 and pH 5.7 and 40 g L-1 of sucrose. The largest diameter of shoots, height, number of leaves and roots of in vitro plants, was achieved after 21 days of cultured in MS salts with 40 g L-1 sucrose. Calluses formation with embryogenic structures from the central cylinder of curled leaves of the nearest segment to the base of thickened shoots was achieved after 45 days of culture. Segments from the central cylinder of the curled leaves are a safe source for the formation of embryogenic calli.

Multiplicación en sistema de inmersión temporal del clon de Malanga Viequera -Xanthosoma spp / Multiplication in temporary immersion system cocoyam clone Viequera - Xanthosoma spp

El Sistema de inmersión temporal (SIT) constituye una alternativa en la micropropagación de plantas. El presente trabajo se realizó con el objetivo de establecer un protocolo para la multiplicación en SIT del clon de malanga “Viequera”. Se evaluó el efecto de tres tiempos de inmersión (7, 14 y 21 minutos), tres frecuencias de inmersión (2, 4 y 6 horas por día), cuatro volúmenes de medio de cultivo (5, 10, 15 y 20 ml por brote inicial) y cuatro tiempos de cultivo (15, 18, 21 y 25 días) en la multiplicación de los brotes de yemas axilares. Con tiempo de inmersión de 14 minutos cada 4 horas, un volumen de 15 ml de medio de cultivo por brote inicial y 18 días de cultivo, se logró el mejor comportamiento en la multiplicación de los brotes de yemas axilares, con un coeficiente de multiplicación de 10,50. El protocolo propuesto aumenta la productividad del material propagado en comparación con los desarrollados en medios de cultivo semisólidos, lo que representa una reducción en los costos de producción al introducir la multiplicación del cultivo en laboratorios comerciales de propagación.

Temporary Immersion System (TIS) is a alternative in the micropropagation of plants. This work was carried out to establish a protocol for the multiplication of clone TIS cocoyam “Viequera”. The effect of three immersion times (7, 14 and 21 minutes), three immersion frequencies (2, 4 and 6 hours per day), four volumes of culture medium (5, 10, 15 and 20 mL per shoot initial) and four times of cultivation (15, 18, 21 and 25 days) in the multiplication of shoots from axillary buds. With immersion time of 14 minutes every 4 hours, a volume of 15 ml of culture medium for initial outbreak and 18 days of culture, achieved the best performance in the multiplication of shoots from axillary buds, with a coefficient of multiplication 10.50. The proposed protocol increases the productivity of propagated material compared to those developed in semisolid culture media, representing a reduction in production costs by introducing the increase in cultivation in commercial laboratories.

Optimización de un medio de cultivo para plantas micropropagadas de dioscorea alata L / Optimization of a culture medium for micropropagated plants of dioscorea alata L

La propagación de material de ñame de buena calidad es esencial para incrementar la producción sostenible de este cultivo. El presente trabajo tuvo como propósito optimizar el medio de cultivo de micropropagación de Dioscorea alata L. clon Caraqueño a través de los siguientes objetivos: determinar el efecto de diferentes antioxidantes (carbón activado 0,5 g/L-1 ; carbón activado 1,0 g/L-1; cisteína 10 mg/L-1, 20 mg/L-1 y 30 mg/L-1) y concentraciones de sales de Murashige y Skoog (MS) (25, 50, 75 y 100 %) en el medio de cultivo durante el establecimiento y la multiplicación de las plantas in vitro, y evaluar la utilización de distintas combinaciones de ácido naftalenacético (0,01; 0,1 mg/L-1) y bencilaminopurina (0,01; 0,1 mg/L-1) en el mejor medio de cultivo de multiplicación obtenido en el experimento anterior. A los 35 días se seleccionaron 40 plantas in vitro, a las cuales se les determinaron las siguientes variables: longitud en cm del vástago; número de nudos de novo por explantes; número de hojas por explante y porcentaje de fenolización. Se evaluó además, en el experimento con los reguladores de crecimiento, el número de raíces y longitud de la raíz de mayor tamaño. Se aplicó un diseño experimental completamente aleatorio con análisis de varianza bifactorial y clasificación simple. Se realizó la prueba de comparación de medias de Tukey para un nivel de significación del 5%. Los resultados obtenidos mostraron que las sales MS al 75% de su concentración, el carbón activado (0,5 g/L-1) o la cisteína (10 mg/L-1), en combinación con los reguladores de crecimiento ANA/BAP (0,01/0,01 mg/L-1) en el medio de cultivo MS, incrementaron los indicadores de desarrollo de las plantas in vitro tales como número de nudos de novo (3,5), longitud del vástago (4,1 cm), número de hojas (3,8), número de raíces (5,7) y longitud de las raíces (6 cm).

The material propagation of good quality yam is essential to increase the sustainable production of this cultivation. In the present work the optimization of culture medium of Dioscorea alata L. clone Caraqueño micropropagation was carried out through the following objectives: to determine the effect of different anti-oxydants (activated charcoal 0,5 g.L-1; activated charcoal 1,0 g.L-1; cysteine 10 mg.L-1, 20 mg.L-1 and 30 mg.L-1) and Murashige and Skoog salts concentrations (25, 50, 75 and 100%) in the culture medium during the in vitro plants establishment and the multiplication, and to evaluate the use of different combinations of naftalenacetic acid (0,01; 0,1 mg.L-1) and benzylaminopurine (0,01; 0,1 mg.L-1) in the best multiplication medium obtained in the above experiment. At 35 days, 40 in vitro plants were selected. The following variables were determined in these plants: shoot length, cm; leaf and bud explant number; and oxydation phenolic percentage. In the experiment of plant growth regulators was also evaluated, the roots number and greater size root length. A totally randomized experimental design with one and two factor variance analysis and the Tukey test for means comparison at 5% significance level were applied. The obtained results showed that the salts MS at 75% concentration, the activated charcoal (0,5 g. L-1) or the cysteine (10 mg. L-1), in combination with the growth regulators ANA/BAP (0,01/0,01 mg.L-1) in the MS culture medium, increase the development of the in vitro plants, number of novo buds (3,5), shoot length (4,1 cm), number of leaves (3,8), number of roots (5,7) and greater size root length (6 cm).

Efecto de la densidad de inoculación en la formación y morfología de los embriones somáticos de plátano (Musa spp. AAAB, cv. híbrido FHIA-21) / Effect of inoculum density on formation and morphology of plantain somatic embryos (Musa spp. AAAB, cv. Hybrid ‘FHIA-21’)

La embriogénesis somática constituye una interesante propuesta para la propagación masiva de plantas del cultivar híbrido FHIA-21 (Musa AAAB). Sin embargo, se caracteriza por ser un proceso asincrónico, dado por la presencia de embriones somáticos en diferentes etapas de desarrollo ontogénico. La reducción de la asincronía es un aspecto importante para la utilización de este sistema de regeneración en la propagación de plantas. Esta investigación se realizó con el objetivo de determinar el efecto de la densidad de inoculación sobre la formación y el desarrollo morfológico homogéneo de los embriones somáticos del cv. FHIA-21. Con este propósito se adicionaron 0,5; 1,0; 1,5 y 2,0 g de masa fresca (gMF) de agregados celulares embriogénicos en Erlenmeyers (250 ml), que contenían 30 ml de medio de cultivo líquido. Las evaluaciones se realizaron a los 30 días de cultivo con la determinación del número y la longitud de los embriones somáticos (mm). Además de una descripción morfológica e histológica de estos. Los resultados mostraron el efecto regulatorio de la densidad de inoculación en la formación y el desarrollo morfológico de los embriones somáticos. La mayor formación de embriones con un desarrollo morfológico homogéneo se produjo en 1,5 gMF de densidad de inoculación. Esta proporcionó un 86,4% de embriones con una longitud de 0,21 a 4,0 mm, y el estudio de las secciones histológicas mostró evidencias histológicas de la etapa globular. La sincronización durante la formación y el desarrollo de los embriones somáticos del cv. FHIA-21 aumentó la eficiencia del proceso de embriogénesis somática.

Somatic embryogenesis is an interesting proposal for mass propagation of plants from the FHIA-21 (Musa AAAB). However, it is characterized by an asynchronous process, due to the presence of somatic embryos at different stages of ontogenetic development. Reduction of asynchrony is an important aspect to use this system of regeneration in plant propagation. Effect of inoculation density on the formation and uniform morphological development of somatic embryos of cv. ‘FHIA-21’ was determine by adding 0.5, 1.0, 1.5 and 2.0 g of fresh mass (gMF) of embryogenic cell aggregates, in Erlenmeyer flasks (250 ml) containing 30 ml liquid culture medium. Evaluations were made within 30 days of culture determining the number and length of somatic embryos (mm). Also, morphological and histological descriptions of these were analyzed. Results showed the regulatory effect of inoculation density on the formation and morphological development of somatic embryos. The biggest formation of embryos with a uniform morphological development occurred in 1.5 gMF inoculation density. This provided 86.4% of embryos with a length of 0.21 to 4.0 mm and the study of histological sections showed histological evidence of the globular stage. Synchronization during the formation and development of somatic embryos cv. FHIA-21 increased the efficiency of somatic embryogenesis.

Nuevo método para la selección rapida de plantas de banano (Musa spp. AAA cv. Grande naine) transformadas con gen bar procedentes de campo, empleando glufosinato de amonio / New method for rapid selection of banana (Musa spp. AAA cv. Grande naine) plants with bar gene in the field using ammonium gluphosinate

Los genes marcadores de la selección son ampliamente utilizados para la transformación eficiente de diferentes cultivos, sin embargo, existen muy pocas referencias sobre el desarrollo de métodos de selección temprana en campo de plantas supuestamente transformadas con marcador de selección tipo herbicidas. La presente investigación tuvo como objetivo evaluar el efecto del glufosinato de amonio a partir del herbicida Finale en los fragmentos de hojas de plantas de campo cultivados in vitro, para la selección de líneas transformadas de banano cv. Grande naine (Musa spp. AAA), con una construcción que porta como marcador de selección el gen bar. A partir del método desarrollado con el empleo de fragmentos de hojas de plantas procedentes de campo, cultivados in vitro en el medio de cultivo agar al 1% más agua y 30,0 g/l-1 de glufosinato de amonio se logró diferenciar las dos líneas transformadas del control no transformado, a partir de la expresión del gen bar. Ambas líneas fueron positivas en el análisis molecular de PCR. Estos resultados permiten disponer de una herramienta útil y simple como parte de un protocolo de transformación genética para el cultivo del banano, siendo el primer informe de este resultado a nivel internacional.

Selector marker genes are widely used for the efficient transformation of different crops; however, there are very few references on the development of early selection methods in the fields of potentially transformed plants for herbicides. The objective of this research was to evaluate the effect of ammonium gluphosinate from the herbicide Finale in leaf fragments from in vitro plants grown in the fields for the selection of putative transformed lines of banana cv. Grande naine (Musa spp. AAA), with a construction that has the bar gene as the selector marker gene. Since the method developed with the use of leaf fragments from field plants culture in vitro in the agar at 1% more water and 30.0 gl-1 ammonium gluphosinate did differentiate the two transformed lines untransformed control, from the bar gene expression. Both lines were positive in the PCR molecular analysis. These results were a useful tool and form a part of a protocol of genetic transformation for banana, being the first reported result.

Evaluación en campo de plantas de ñame (Dioscorea alata L) obtenidas de los microtubérculos formados en sistema de inmersión temporal / Field evaluation of yam plants (Dioscorea alata L) obtained from microtubers produced in a temporary immersion system

Los microtubérculos en algunas especies de plantas constituyen una importante alternativa como material vegetal de plantación. Se definió como objetivo de trabajo evaluar en campo la respuesta morfoagronómica de las plantas obtenidas de los microtubérculos de ñame formados en Sistema de Inmersión Temporal (SIT). Como variantes experimentales se plantaron tres categorías de microtubérculos, clasificados según su masa fresca (I. de 0,5 a 0,9 g; II. de 1,0 a 2,9 g; III. igual o mayor de 3,0 g), plantas in vitro previamente aclimatadas y corona de tubérculo. Se evaluó el efecto de la masa fresca de los microtubérculos sobre su brote, supervivencia y posterior desarrollo de las plantas derivadas de ellos en campo. Con los microtubérculos de ñame, con una masa fresca igual o superior a 3,0 g, se alcanzó el más alto porcentaje de brotación (91,30%) y supervivencia de las plantas (96,50%), así como las mejores respuestas en los caracteres cuantitativos que se evaluaron en campo. Estos resultados confirmaron la importancia de la masa fresca de los microtubérculos para ser empleados como material vegetal de plantación directo en campo.

Microtubers in some plant species represent an important alternative crop-planting material. The presentwork involved field work for evaluating the morphoagronomic response of plants obtained from yam microtubersproduced in a temporary immersion system (TIS). Three categories of microtuber were planted asexperimental variants; they were classified by fresh mass (1 - 0.5 to 0.9 g, 2 - from 1.0 to 2.9 g and 3 - equal to or greater than 3.0 g), previously in vitro-acclimated plants and tuber crowns. The effect of microtuber freshweight on their sprouting, survival and later development of the plants derived from them in the field were evaluated. The highest sprouting (91.30%) and plant survival percentages (96.50%) and the best response in quantitative traits evaluated in the field were obtained with yam microtubers having a fresh mass equal to or greater than 3.0 g. These results confirmed the importance of microtubers’ fresh weight for using them as plant material in direct planting in the field.

Protocolo para la formación de microtubérculos de ñame (Dioscorea alata L) en sistema de inmersión temporal / A protocol for yam (Dioscorea alata L) microtuber formation in temporary immersion system

Con el propósito de desarrollar un protocolo para la formación de microtubérculos en el clon de ñame Pacala Duclos (Dioscorea alata L) en sistema de inmersión temporal, que pudiera ser usado como alternativa para la propagación de esta especie, se deinieron como objetivos de trabajo determinar el efecto del tiempo y la frecuencia de inmersión, así como la inluencia del volumen de medio de cultivo por planta cultivada in vitro. Con el empleo de 15 min de inmersión y una frecuencia de inmersión cada 6 horas, se alcanzaron los mejores resultados en cuanto al número de microtubérculos formados por planta. Con este tiempo y frecuencia de inmersión los microtubérculos presentaron la mayor masa fresca y seca, así como el mayor diámetro. Además, a las 18 semanas de cultivo se obtuvo el mayor número total de microtubérculos por sistema y el mayor número de microtubérculos aprovechables como material vegetal de propagación. En cuanto al volumen de medio de cultivo por planta, con 60 ml de medio de cultivo por planta in vitro se alcanzó el mayor número de microtubérculos aprovechables, los cuales presentaron el contenido más alto de materia seca. Los microtubérculos obtenidos en este tipo de sistema de inmersión temporal presentaron una masa fresca superior a 2,40 gMF, lo cual podría permitir su uso como material de plantación directo a campo

The following working objectives were deined for developing a protocol for ´Pacala Duclos´ yam clone (Dioscorea alata L) microtuber formation in temporary immersion systems (TIS): time effect, immersion frequency and culture medium volume inluence per in vitro cultivated plant. The results led to deining that the highest performance regarding microtuber number formed per plant was achieved with a 15-minute immersion time and six-hourly immersion frequency; the microtubers presented the greatest dry and fresh weight and largest diameter at such immersion time and frequency. Furthermore, the highest total number of microtubers per system and the largest number of microtubers usable for planting (vegetal propagation) material were obtained after 18 weeks’ culture. Regarding culture medium volume per plant, the greatest amount of usable microtubers was achieved with 60 ml per in vitro plant, microtubers presenting the highest dry matter content. As microtubers obtained in this type of TIS had fresh weights higher than 2.40 gFW they could be used as direct planting material in ield conditions

Efecto de la densidad de inóculo en la multiplicación y diferenciación de suspensiones celulares embriogénicas en el cultivar híbrido de banano FHIA-18 (Musa spp AAAB) / The effect of inoculum density on embryogenic cell suspension proliferation and differentiation in banana hybrid cultivar FHIA-18 (Musa spp AAAB)

La obtención de un sistema de regeneración eficiente por medio de la embriogénesis somática en las Musaceas, es hoy una gran herramienta ante los enormes problemas que presenta este género con el ataque de enfermedades como la sigatoka negra. El objetivo del trabajo es determinar las densidades celulares adecuadas para las etapas de multiplicación de suspensiones celulares embriogénicas y formación de los embriones somáticos en medios de cultivo líquidos. Como material vegetal se usaron brotes inmaduros de la inflorescencia masculina de Musa AAAB, cv. FHIA-18. Los resultados demostraron que es posible el establecimiento de suspensiones celulares homogéneas a partir de embriones somáticos en etapa globular, y obtener los mayores volúmenes de biomasa celular al multiplicar dichas suspensionescon una densidad del 3% del volumen de células sedimentadas. A partir del decimoquinto día en el medio de cultivo de formación de embriones comenzaron a formarse estructuras compuestas por proembriones y embriones somáticos en etapa globular; entre las densidades estudiadas los mejores resultados se obtuvieron con 100 mgMF en la cual se formaron 1 871 ES.l-1 con un peso de 248 mgMF.l-1.

An extremely useful tool for dealing with the enormous problems involved in banana growing (Musaceae) caused by the attack of diseases such as black Sigatoka can be obtained today by ensuring an efficient regeneobration system via somatic embryogenesis. The work was aimed at defining appropriate cell densities for embryogenic cell suspension growth stages and somatic embryo formation in liquid culture medium. Immature male inflorescence buds from Musa AAAB cf FHIA-18 were used as vegetal material. The results showed that it is possible to establish homogeneous cell suspensions from somatic embryos in globular stage andobtain greater cell biomass volume by multiplying the suspension with 3% sedimented cell volume (density).Embryos began to form structures in culture medium consisting of globular stage somatic proembryos and embryos from the fifteenth day onwards. The best results amongst the densities studied were obtained with 100 mgMF, in which 1,871 ES.l -1 were formed weighing 248 mgMF.l-1.

Multiplicación in vitro de segmentos nodales del clon de ñame Blanco de Guinea (Dioscorea cayenensis - D. rotundata) en sistemas de cultivo semiautomatizado / Blanco de Guinea (Dioscorea cayenensis - D. rotundata)yam clone in vitro nodal segment multiplication in a temporary immersion system

Con el empleo del sistema de inmersión temporal fue posible incrementar la multiplicación in vitro de los segmentos nodales en el clon de ñame Blanco de Guinea. Con este tipo de sistema de cultivo se obtuvieron los más altos valores para la altura de la planta, número de entrenudos por planta, así como para la masa fresca y seca de las mismas. Las condiciones de cultivo creadas en el sistema de inmersión temporal para la multiplicación in vitro de los segmentos nodales lograron el más alto coeficiente de multiplicación (8,50), así como redujeron el número de plantas con síntomas de vitrificación (3,30). Las plantas cultivadas en este tipo de sistema de cultivo se caracterizaron por el mayor crecimiento de los segmentos nodales, coloración verde y hojas más desarrolladas. La utilización de este tipo de sistema de cultivo en la fase de multiplicación in vitro de los segmentos nodales posibilitará incrementar el empleo de la micropropagación para la producción de semilla en el complejo Dioscorea cayenensis - D. rotundata

Free radical scavengers from Cymbopogon citratus (DC.) stapf plants cultivated in bioreactors by the temporary immersion (TIS) principle.

The biomass production of Cymbopogon citratus shoots cultivated in bioreactors according to the temporary immersion (TIS) principle was assessed under different growth conditions. The effect of gassing with CO2-enriched air, reduced immersion frequency, vessel size and culture time on total phenolic and flavonoid content and free radical scavenging effect of the methanolic extracts was measured. From the TIS-culture of C. citratus, seven compounds were isolated and identified as caffeic acid (1), chlorogenic acid (2), neochlorogenic acid (3), p-hydroxybenzoic acid (4), p-hydroxybenzoic acid 3-O-beta-D-glucoside (5), glutamic acid (6) and luteolin 6-C-fucopyranoside (7). The occurrence of compounds 1-7 and their variability in C. citratus grown under different TIS conditions was determined by HPLC. The free radical scavenging effect of the methanolic extract and compounds was measured by the discoloration of the free radical 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH). The main metabolites in 6- and 8-week-old cultures, both in 5 and 10 1 vessels, were chlorogenic acid (2) (100-113 mg%) and neochlorogenic acid (3) (80-119 mg%), while in the cultures with CO2-enriched air and reduced immersion frequency the main compound detected in the extracts was glutamic acid (6) (400 and 670 mg% for the green and white biomass and 619 and 630 mg% for the green and white biomass, respectively). The most active compounds, as free radical scavengers, in the DPPH discoloration assay were caffeic acid (1), chlorogenic acid (2), neochlorogenic acid (3) and the flavonoid luteolin 6-C-fucopyranoside (7).